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抗體和重組蛋白的使用及保存方法

日期:2025-09-16瀏覽:13次

一、抗體使用規范與保存策略

1. 接收與預處理

離心操作:4℃條件下12,000rpm離心3分鐘(體積<50μl需延長至5分鐘),確保管壁附著物完-全收集

分裝原則:按單次使用量分裝(≥10μl/份),避免反復凍融導致的活性損失

特殊類型處理:

腹水抗體需立即凍存(含蛋白酶易降解)

熒光標記抗體需全程避光操作

2. 保存條件優化

長期保存:-20℃(普通抗體)或-80℃(珍貴抗體),添加50%甘油可降低凍融損傷

短期保存:4℃不超過2周,置于冰箱內層遠離除霜區

防腐措施:0.02%疊氮鈉可抑制微生物生長(活細胞實驗禁用)


二、重組蛋白使用規范與保存策略

1. 復溶與稀釋

凍干蛋白:使用無菌水復溶,86μl水/100mg凍干粉,輕搖溶解(禁止渦旋)

溶液態蛋白:保持天然構象,避免劇烈震蕩導致結構破壞

2. 保存體系構建

溫度控制:-80℃保存,添加10-50%甘油增強穩定性

濃度要求:≥1mg/ml以減少管壁吸附損失

速凍技術:液氮速凍后轉移至-80℃可最大限度保持活性

三、運輸與穩定性保障

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四、常見問題解決方案

活性下降:檢查離心條件是否達標(12,000rpm),分裝體積是否≥10μl

非特異性結合:優化封閉劑濃度(建議5%BSA)和洗滌次數(≥3次)

沉淀問題:調整緩沖液pH至7.2-7.4,降低鹽濃度至100-150mM


五、最佳實踐建議

標準化流程:建立接收-分裝-使用-記錄的完整SOP

溫度監控:配備溫度記錄儀(±2℃精度)

庫存管理:實施先進先出原則,定期檢查試劑狀態

驗證測試:新批次試劑需進行活性驗證(如ELISA效價檢測)

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